生殖道支原体流行病学研究及BALB/c小鼠下生殖道感染模型建立

【摘要】支原体是一类缺乏细胞壁、基因组较小的原核微生物。目前已被证实对人类有致病性的6种支原体中,3种为生殖道支原体：分别为生殖支原体(Mycoplasmagenitalium,Mg)、解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)和人型支原体(Mycoplasmahominis,Mh)。生殖道支原体主要吸附于泌尿生殖道上皮及精子等细胞表面,可导致非淋菌性尿道炎(Non-gonococcalurethritis,NGU)、持续性或复发性尿道炎、附睾炎、子宫内膜炎、盆腔炎(Pelvicinflammatorydisease,PID)、及早产、胎膜早破等不良妊娠结局等。Mg近年来被证实为一种性传播疾病(Sexualtransmitteddiseases,STD)病原体。流行病学研究表明,患有急性NGU的男性患者中Mg感染率为5%-42%,而在非淋菌性非沙眼衣原体性尿道炎(Non-chlamydialnon-gonococcalurethritis,NCNGU)患¨者中,感染率为18%-46%。此外,越来越多的研究发现Mg感染后可促进HIV的感染和传播。然而不同于其他支原体或STD病原体,国内外在Mg感染现状的流行病学报道较少。仅有的一些流行病学研究也集中于女性性工作者(Femalesexworkers,FSWs)及STD门诊患者等群体,不能反映其他人群中的Mg感染情况。男男性行为者(Menwhohavesexwithmen,MSM)作为HIV感染及传播的高危人群,因其HIV感染率逐年增加而受到了性病预防控制中心的高度重视,但目前仅有数篇文献报道了该人群中Mg的感染情况。因此,了解该人群中Mg的流行情况并分析Mg与HIV之间的关系,对HIV的控制和预防有着重要意义。流行病学研究是基于临床或人群的研究,可提供横断面数据。考虑到人体生殖道局部环境较为复杂,可并存其他多种微生物,在临床症状方面也有一定的协同作用。动物模型则是一种比较直观的研究方法,可尽最大可能统一宿主条件,避免众多临床因素引起干扰,可进一步探讨致病机制及致病因素。Mg生长缓慢、对培养要求条件苛刻、培养极其困难,自1981年首次被报道以来,仅1例成功建立动物模型的研究。而Uu的体外培养较为容易,较多研究使用Uu建立动物模型。Uu被分为生物群1(Parvo)及生物群2(T960)两个亚群：生物群1包括血清型1、3、6、14型,生物群2包括2、4、5、7-13型等10个血清型。Uu感染后可导致多种泌尿生殖道疾病甚至垂直传播导致新生儿支原体感染等,但目前关于Uu的致病性是否和特定血清型相关、Uu致病性与宿主之间的关系等仍不清楚。多数流行病学研究仅从生物群水平探讨两个生物群间感染率的差异,而不足以解释Uu各血清型之间的致病性差异。相关的动物研究也多关注于单个型别或一些常见型别,而对少见型别如血清型2、9、5、7等的致病性情况并无较多了解。此外,目前多使用Uu常见型别建立药效评价模型,而忽视了其致病特征与特定血清型之间的关系。因此,建立Uu的14个型别的动物模型可深入了解Uu各型别间致病性差异,并为筛选最适血清型建立药效评价模型提供基础。全文分为两部分,各部分主要内容分述如下：第一部分：深圳男男性行为者生殖支原体流行病学调查及危险因素分析于2010年1月至5月,对深圳的MSM人群进行抽样调查。在深圳MSM人群聚集的娱乐场所或公共场所纳入合适的研究对象并采集人口社会学资料、收集受试者首段尿(Firstvoidurine,FVU)及直肠拭子标本,采用TaqmanMGB荧光定量PCR法检测MgDNA,并分析Mg感染的危险因素。研究期间共有409名MSM被纳入,以汉族、外来人口为主。其中95.5%(374/390)自我认同为同性恋,89.4%(349/390)仅与男性或较少女性发生性行为,22.9%(93/406)曾参加过性交易活动。95.1%(386/406)最近半年内曾与男性发生过肛交性行为,其中71.4%(275/385)使用了安全套。26.1%(106/405)最近半年内曾与女性发生性关系。55.7%(228/405)借助互联网寻找性伴。共收集811份直肠拭子和尿液标本,Mg总阳性率为8.1%(33/406,95%CI5.7%-10.6%)。406份FVU中Mg阳性率为3.4%(14/406,95%CI1.7%-5.4%),405份直肠拭子标本中阳性率为5.4%(22/405,95%CI3.5%-7.7%)。单因素分析及多因素分析均显示：较多与女性发生性关系者、在过去6个月内发生过无保护肛交者较仅与男性发生性关系者及未发生无保护肛交者Mg感染风险升高。提示MSM人群中Mg感染的主要部位可能是直肠,且双性恋人群是Mg感染及传播的高危人群,应引起进一步的重视。第二部分：解脲脲原体14血清型BALB/c小鼠感染模型中致病性初探采用雌性7周龄BALB/c小鼠及ATCC保藏的Uu14个血清型标准菌株建立动物模型。设立空白对照组、雌激素对照组及14个血清型感染组,每组随机分配15只小鼠。除空白组外,雌激素对照组与各型别感染组小鼠分别经阴道接种无菌Uu液体培养基及颜色改变单位(Colorchangeunit,CCU)浓度为1×107CCU/mL的各型别标准菌液,接种后定期观察小鼠外阴形态变化。接种后第3、7、14、21天,对各组小鼠采集阴道冲洗液并进行培养、CCU法定量并检测肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor,TNF)-α、白介素(Interleukin,IL)-1β水平。接种后第3、21天,每组随机处死5只小鼠,取阴道、子宫标本,甲醛溶液固定后进行组织病理检查。研究发现接种后空白对照组和雌激素对照组两组小鼠阴道冲洗液中均无Uu生长、各时间点阴道冲洗液中TNF-αα及IL-1p均维持在较低水平。UUR各感染组各时间点小鼠阴道冲洗液培养阳性率较UPA高,且随着时间延长CCU逐渐下降。各感染组TNF-α及IL-1β水平变化呈现不同趋势：血清型1/4型接种后第3天炎性因子水平达到峰值,而至接种后21天则下降至对照组水平；血清型8/13组小鼠阴道冲洗液中两炎性因子水平至感染后第14天达到最高值,此后逐渐降低至对照组水平；血清型2/7/9/11/12/14型接种后两炎性因子水平逐渐升高,至接种后第21天炎性因子达到峰值。组织病理结果显示,各型别接种后小鼠阴道组织几乎不被累及,子宫则出现不同程度的急慢性炎症反应,其中4型主要导致急性炎症反应,1/3/11/8型主要导致慢性炎症反应。提示BALB/c小鼠下生殖道感染Uu后,主要导致宫颈炎、子宫内膜炎。血清型1、3、14、4、8、11型可能是14个型别中的主要致病型别,而其他型别可能是条件致病菌或非下生殖道常驻菌群。血清型13型可能导致隐性感染。血清型3、14、8、11型感染后在BALB/c小鼠下生殖道中定植时间较长,可导致子宫持慢性炎症反应,可能更适合作为药效评价模型的感染型别。
【作者】郑冰洁；
【导师】尹跃平；
【作者基本信息】北京协和医学院，皮肤病与性病学，2014，博士
【关键词】生殖支原体；解脲脲原体；微小脲原体；男男性行为者；流行病学；小鼠；近交BALB/c；毒力；

【参考文献】
[1]封禹.中国通货膨胀预警模型的建立[D].天津财经大学,金融学,2012,硕士.
[2]李珊.共容与发展：我国国有资产管理体制改革研究[D].南京大学,行政管理,2013,硕士.
[3]张金.老年患者万古霉素群体药动学研究[D].福建医科大学,药学,2014,硕士.
[4]吴宣萱.神经内镜下经鼻扩大至斜坡区手术入路的相关研究[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[5]李莹.中国财政转移支付制度下的基本公共服务均等化绩效评价[D].华中师范大学,区域经济学,2013,硕士.
[6]刘浩炳.铁路货车轴颈轴承的偏载效应分析[D].西南交通大学,载运工具运用工程,2013,硕士.
[7]郑华平,蒋维三,张廷山.利用AVO技术检测杭州湾地区第四系浅层生物气[J].石油地球物理勘探,2006,S1:21-24+142-144.
[8]董希望.将被遗忘的改革——1990年代我国大学改革的历史述评[J].浙江社会科学,2014,11:82-93+157-158.
[9]谢远丹.中国竹雕文化及其旅游开发研究[D].南京农业大学,专门史,2011,硕士.
[10]欧雪银.国有企业企业家选择机制市场化问题研究[D].湖南大学,政治经济学,2003,硕士.
[11]石杉杉.基于国家园林城市的澧县城市绿地系统专项规划研究[D].中南林业科技大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[12]杨硕.颅内组织异变的电特性分析及计算机仿真[D].河北工业大学,电工理论与新技术,2004,硕士.
[13]周美修.滇池铜绿微囊藻春化作用研究[D].重庆大学,市政工程,2014,硕士.
[14]田彩云.尽“美”尽“善”[D].河北师范大学,现当代文学,2012,硕士.
[15]白恩宇.北京公共厕所建设与管理的研究[D].天津大学,高级工商管理（EMBA）,2013,硕士.
[16]杨洪禄.建筑企业安全投入研究[D].天津大学,项目管理,2013,硕士.
[17]赵飞.大学生运动员完美主义问卷的编制[D].首都体育学院,应用（运动）心理学,2013,硕士.
[18]马雪英.硅质铁尾矿粉用作混凝土掺合料的应用研究[D].清华大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[19]邓红莲.三江集团内部信息网安全体系研究和建设[D].四川大学,电子与通信工程,2003,硕士.
[20]巩建闽,王国胜,萧蓓蕾.基于Rough集的数据库信息挖掘加权决策算法[J].计算机工程与应用,2003,32:198-200.
[21]侯大力.近临界凝析气藏注CO_2提高采收率机理及埋存研究[D].西南石油大学,油气田开发工程,2014,博士.
[22]姬智.絮凝沉淀协同生物除磷的研究[D].郑州大学,市政工程,2013,硕士.
[23]徐新慧.瘤胃兼性厌氧纤维素降解菌的筛选与纤维素降解复合菌系的构建[D].河南农业大学,微生物学,2012,硕士.
[24]黄军高,王首顶,凌强,陈伟,杨斌.时间序列数据库在地区电网调控一体化系统中的应用[J].电力系统自动化,2011,23:107-111.
[25]周长东,王京京.铁路桥梁的地震易损性分析[J].北京交通大学学报,2014,04:101-106.
[26]侯鹏.智能机器人运动控制系统及算法研究[D].北京交通大学,2013.
[27]曹盛林.光化学衍生技术在离子色谱中的应用[D].浙江大学,分析化学,2013,硕士.
[28]张梅灵.兆瓦级燃机高压级静叶流热固耦合数值研究[D].清华大学,动力工程及工程热物理,2013,硕士.
[29]黄恩才.基于GIS和能力谱方法的高层建筑震害预测动态管理系统[D].天津大学,结构工程,2004,硕士.
[30]郭薇,赵琦,祭程,朱苗勇,宋景欣,冷祥贵.板坯连铸温度场实时仿真系统的研究和实现[J].冶金自动化,2007,02:49-52.
[31]李佐阳.On Flexibility in C-e Diplomatic Interpreting: a Skopos Theory Perspective[D].西安外国语大学,MTI翻译,2014,硕士.
[32]黄德才.求广义指派决策问题最优解的有效算法[J].控制与决策,1999,03:81-84.
[33]李依诺.《紫色》中个人身份的探寻[D].浙江大学,英语语言文学,2014,硕士.
[34]桂娟.高压液体钽电容器工作电解质的研究[D].天津大学,微电子学与固体电子学,2003,硕士.
[35]马国伟.基于聚类的心电信号分类方法的研究[D].华东理工大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[36]孙雪扬.宗教NGO在拓展台湾“国际空间”中的角色分析[D].国际关系学院,国际政治,2013,硕士.
[37]窦晶晶.北京城区近地面气象要素精细化时空分布特征[D].中国气象科学研究院,气象学,2014,硕士.
[38]王东东.PASolution中间件在京唐热轧过程控制系统中的应用[J].冶金自动化,2010,05:56.
[39]熊荆江.某航空发动机高空模拟试车台供气系统设计研究[D].湖南大学,机械工程,2011,硕士.
[40]曹亚廷.信用衍生品发展与银行业稳定：理论与实证[D].复旦大学,金融学,2013,博士.
[41]刘家炜.柳宗元廉政思想的探析[D].湖南师范大学,行政管理,2014,硕士.
[42]赵燕伟,姜高超,周建强,洪欢欢,何路.基于多维关联函数的产品低碳设计实例动态分类方法[J].计算机集成制造系统.
[43]周瑛.虚拟场景下运动想象脑电信号识别研究[D].杭州电子科技大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[44]张冬青.电子商务环境下咨询企业新运营模式交易控制机制研究[D].西南交通大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[45]张学敏.基于虚拟轧制的冷连轧机控制策略研究[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士.
[46]李波芳.基于精益生产理念的C公司物流系统改善[D].厦门大学,物流工程,2014,硕士.
[47]杨红标.中国女乒运动员运动损伤预防训练方法的研究[D].首都体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[48]高亚楠.基于GIS的城市社区家庭通勤交通碳排放热点分析[D].长安大学,交通工程,2013,硕士.
[49]黄倩.副溶血弧菌转录因子AphA调控生物膜基因的初步研究[D].西南大学,基础兽医学,2014,硕士.
[50]张颖.向导关系对流动儿童社会化的影响分析[D].首都经济贸易大学,社会工作（专业学位）,2013,硕士.